293T/17 人胚腎細胞 STR鑒定

293T/17 人胚腎細胞  STR鑒定

細胞介紹

293T/17細胞株是293T (293tsA1609neo)細胞株的衍生株。 293T 是293細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株。 293T細胞進行克隆，檢測pBND和pZAP載體(ti) ，得到一株能生成高滴度感染逆轉錄病毒的衍生株，293T/17。 細胞持續表達猿病毒40(SV40)大T抗原，而因其高轉染能力篩選到17號克隆。 293T/17細胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2載體(ti) 轉染得到ANJOU 65 細胞株。 ANJOU 65細胞再用pCRIPgag-2 和 pGPT2E載體(ti) 轉染得到親(qin) 宅性外殼表達細胞株BOSC 23。ANJOU 65細胞用攜帶gpt抗性基因的pCRIPAMgag載體(ti) 轉染得到Bing 雙向性表達包裝細胞株。

細胞特性

1） 來源：人 胚胎腎髒

2） 形態：上皮樣細胞  貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅(jin) 供科研使用。

運輸和保存

幹冰運輸及複蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

（2）T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。

細胞接收後的處理

1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yang) 箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會(hui) 因振動脫落和脫落後成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yang) 瓶中灌液培養(yang) 基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yang) 瓶中）,加入新配製的完quan培養(yang) 基6-8mL，放到細胞培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳(chuan) 代處理。傳(chuan) 代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完quan培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。

293T/17 人胚腎細胞  STR鑒定              

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備

1）準備DMEM培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%； 雙抗 1%,  建議在wan全培養(yang) 基中添加（L-穀an酰胺（2mM）1%；NEAA  1% ）。

注意：

1.該細胞貼壁能力較弱，培養(yang) 時可酌情使用預鋪0.2%明膠的培養(yang) 瓶/培養(yang) 皿。在運輸過程中，細胞會(hui) 漂浮聚團生長，收到細胞時同時收集懸浮細胞和貼壁細胞離心重懸後傳(chuan) 代培養(yang) 。

2.如果發生293T/17細胞不貼壁，漂浮在培養(yang) 基中的現象，可以酌情在培養(yang) 基中添加（L-穀an酰胺（2mM）1%；NEAA  1% ）以便正確緩衝(chong) 培養(yang) 基。促使懸浮細胞更好的存活以及細胞更容易貼壁。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的複蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完quan培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

該細胞貼壁能力較弱(半貼壁半懸浮）細胞，，傳(chuan) 代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yang) 瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由於(yu) 細胞貼壁不牢PBS潤洗後細胞會(hui) 脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白mei、-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yang) 液後重懸混勻後將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書(shu) 要求配置的新的培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。

下麵T25瓶為(wei) 例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳(chuan) 代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決(jue) 定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為(wei) 1×10^6~1×107個(ge) 活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(ge) 活細胞/ml分配到一個(ge) 凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。