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RAW264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
細胞描述
此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表麵抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅並吞噬乳膠顆粒與(yu) 酵母聚糖。可以抗體(ti) 依賴性地分解綿羊紅血球與(yu) 腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。
細胞特性
1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞
2） 形態：不規則圓形，紡錘狀，貼壁細胞，少量懸浮。
3） 含量：>1x10^6 細胞數
4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅(jin) 供科研使用。
運輸和保存
幹冰運輸及複蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。
（2）T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。
細胞接收後的處理
1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。
3）半貼細胞或貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心後用完quan培養(yang) 基重懸後打回到原培養(yang) 瓶中繼續培養(yang) ，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳(chuan) 代，傳(chuan) 代時需要收集培養(yang) 基中懸浮的細胞離心後回收。
4）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完quan培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。 收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。
RAW264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：
1） 準備DMEM(包含2mM L-穀an酰胺，0.11g / L丙tong酸鈉) (推薦iCell-0001)培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清10 %；P/S青mei素-鏈mei素 1%。
2） 注意事項：
（a）在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長並呈現出長方體(ti) 的形態和有“偽(wei) 足"延伸。隨著培養(yang) 時間的增加，細胞呈現圓形並以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會(hui) 有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yang) 基中，鏡下觀察會(hui) 發現懸浮和貼壁的細胞會(hui) 同時出現。
（b）該細胞傳(chuan) 代時不需要用yi酶消化。傳(chuan) 代時，用無菌細胞刮刮拭培養(yang) 表麵將細胞刮落，收集離心後重懸接種到新的培養(yang) 瓶中。
（c）該細胞形態上包含鬆散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會(hui) 輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳(chuan) 代時應收集起來，離心後細胞沉澱可以繼續培養(yang) 。（d）血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質量的胎牛血清。
3） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。
4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1）凍存細胞的複蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完quan培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
該細胞為(wei) 懸浮和輕微的貼壁細胞，傳(chuan) 代可以參考以下方法：
該細胞用細胞刮鏟替代yi酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yang) 表麵將細胞刮落，收集細胞後離心去上清，重懸後接種到新的裝有新鮮培養(yang) 液的培養(yang) 瓶內(nei) 。收貨後第一次傳(chuan) 代1:2進行，後續可以根據實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳(chuan) 代。
3） 細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。
下麵T25瓶為(wei) 例；
1. 1，細胞用細胞刮鏟替代yi酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yang) 表麵將細胞刮落，收集細胞。
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(ge) 活細胞/ml分配到一個(ge) 凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。
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