大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞 種屬鑒定

細胞介紹

RLE-6TN（大鼠肺上皮 T 抗原陰性）細胞係來源於(yu) 使用鏈mei蛋白酶溶液進行氣道灌注從(cong) 56 天大的雄性 F344 大鼠中分離的肺泡 II 型細胞。SV40-T 抗原的表達通過核免疫染色和 PCR 為(wei) 陰性，表明這些細胞是通過自發永生化獲得的。

該細胞係表現出肺泡 II 型細胞的特征，例如含脂質包涵體(ti) （膦 3R 染色和電子顯微鏡檢查）和細胞角蛋白 8 和 19 的表達；細胞不表達堿性磷酸酶活性。據報道，RLE-6TN 細胞表達的幾種趨化細胞因子與(yu) 肺泡 II 型細胞的原代培養(yang) 物相似。在裸鼠中不會(hui) 致瘤。

細胞特性

1） 來源：褐家鼠 肺

2） 形態：肺泡細胞，II型 上皮樣   貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅(jin) 供科研使用。

運輸和保存

幹冰運輸及複蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

（2）T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。

細胞接收後的處理

1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yang) 箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會(hui) 因振動脫落和脫落後成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yang) 瓶中灌液培養(yang) 基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yang) 瓶中）,加入新配製的培養(yang) 基6-8mL，放到細胞培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳(chuan) 代處理。傳(chuan) 代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。                      

大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞  種屬鑒定

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備F12（推薦iCell-0006）培養(yang) 基；添加ITS（10ug/mL胰島素；轉鐵蛋白5.5ug/mL; 5ng/mL硒）1%，EGF  5ng/mL，優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的複蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞傳(chuan) 代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）yi蛋白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化。

3. 輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書(shu) 要求配置的新的培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。

下麵T25瓶為(wei) 例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳(chuan) 代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決(jue) 定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為(wei) 1×106~1×107個(ge) 活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(ge) 活細胞/ml分配到一個(ge) 凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。