U266 人骨髓瘤細胞

U266 人骨髓瘤細胞介紹

該細胞來源於(yu) 多發性骨髓瘤男性患者，表達IgG，分泌IL-6。

細胞特性

1） 來源：人骨髓

2） 形態：淋巴母細胞樣,懸浮生長

3） 含量：>1x106

4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式

（1）幹冰運輸，收到後立即轉入液氮凍存或直接複蘇；

（2）存活細胞，收到後應繼續生長，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

（3）收到細胞後請拍照，3天內(nei) 如果發現汙染，請及時拍照與(yu) 我們(men) 聯係。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞接收後的處理：

1） 收到細胞後，請檢查發貨培養(yang) 瓶的狀況，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳(chuan) 代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 細胞需要售後時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3） 觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會(hui) 有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落後抱團生長，可將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到加有按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基的原培養(yang) 瓶中（或新的培養(yang) 瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到新的培養(yang) 瓶中（加入按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基）。

6）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的*培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後di一次傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代 。

U266 人骨髓瘤細胞培養(yang) 步驟

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備1640(推薦 iCell-128-0002 含NAHCO3  1.5g/L）)培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，15%；雙抗，1%。(注意：該細胞培養(yang) PH值不超過7.0）。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：基礎培養(yang) 基+20%FBS+8%DMSO (細胞培養(yang) 級)。

二． 細胞處理：

1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

注：di一次傳(chuan) 代推薦傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2，以後傳(chuan) 代比例可根據客戶需要自己決(jue) 定。

對於(yu) 懸浮細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yang) 基後，將剩餘(yu) 細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下麵T25瓶為(wei) 例；

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數板計數。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加基礎培養(yang) 基和血清重懸細胞，再加入DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為(wei) 8%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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