CT26 小鼠結腸癌細胞/STR鑒定

CT26 小鼠結腸癌細胞/STR鑒定/鏡像綺點（iCell）介紹

CT26細胞是被N-亞(ya) 硝基-N-甲基脲烷（NNMU）誘導得到的未分化的小鼠結腸癌細胞，該細胞的一個(ge) 克隆形成的細胞係被命名為(wei) CT26.WT。CT26.WT被逆轉錄病毒載體(ti) LXSN穩定轉化形成了一個(ge) 致死性的亞(ya) 克隆CT26.CL25，這一病毒載體(ti) 含有lacZ基因、編碼腫瘤相關(guan) 抗原（TAA）和beta半乳糖苷酶。CT26.WT和CT26.CL25細胞在小鼠中生長速度和致死率都很相似，不同的是CT26.CL25細胞可以表達腫瘤相關(guan) 抗原和beta半乳糖苷酶，因此這兩(liang) 株細胞可以聯合用於(yu) 免疫治療和宿主免疫反應的研究。

細胞特性

1） 來源：小鼠結腸

2） 形態：成纖維細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個(ge) /mL

4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式：

（1）幹冰運輸，收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇；

（2）存活細胞，收到後應繼續生長，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。

（3）收到細胞後請拍照，3天內(nei) 如果發現汙染，請及時拍照與(yu) 我們(men) 聯係。

CT26 小鼠結腸癌細胞/STR鑒定/鏡像綺點（iCell）接受後的處理：

1） 收到細胞後，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們(men) 。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜並將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yang) 基，添加6ml新的*培養(yang) 基。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳(chuan) 代。

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否汙染，若發現汙染或疑似汙染，請及時與(yu) 我們(men) 取得聯係。

細胞用途：僅(jin) 供科研使用。

細胞培養(yang) 操作規程，供參考

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水麵要低於(yu) 凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yang) 基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，加入1mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜。第二天換液並檢查細胞密度。

2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3ml此細胞的培養(yang) 基終止消化。

3. 輕輕吹打後吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，加入1mL培養(yang) 液後吹勻。

4. 收到細胞後*傳(chuan) 代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下麵T25瓶為(wei) 類；

1，細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS清洗一遍後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入1ml含血清的培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。

2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

18新利苹果客户端密码主要產(chan) 品和服務介紹：

        一、原代細胞服務：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yang) 相關(guan) 試劑、kit、培養(yang) 基添加劑等
               原代細胞相關(guan) 技術服務及整體(ti) 實驗外包服務

        二、細胞係服務：
               細胞株/係培養(yang) 、增殖、凍存和相關(guan) 說明書(shu)
               細胞係培養(yang) 過程的技術指導
               細胞係培養(yang) 基、添加劑、血清及相關(guan) 生長因子、試劑等

        三、iPS細胞服務：
               iPS細胞基礎培養(yang) （有滋養(yang) 層or無滋養(yang) 層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎培養(yang) 技術實習(xi)
               新藥及實驗儀(yi) 器上市前評估

        四、其他技術外包服務、客戶定製服務等

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