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人神經母細胞瘤細胞SH-SY5Y/STR鑒定介紹
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉移灶的神經母細胞瘤SK-N-SH細胞係經三次克隆後的亞係(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細胞的飽和密度大於1X106細胞/cm2。
人神經母細胞瘤細胞SH-SY5Y/STR鑒定特性
(1)來源:腦神經母細胞瘤,轉移部位骨髓
(2)形態:上皮細胞樣,半貼壁生長
(3)含量:>1x106個/mL
(4)汙染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
(5)規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式:
(1)幹冰運輸,收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇;
(2)存活細胞,收到後應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
(3)收到細胞後請拍照,3天內如果發現汙染,請及時拍照與我們聯係。
SH-SY5Y人神經母細胞瘤細胞/STR鑒定/鏡像綺點(iCell)用途:僅供科研使用。
細胞接收後的處理:
(1)收到細胞後,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給我們。
(2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,酒精消毒瓶壁並將T25瓶置於37℃培養約2-3h。
(3)T25瓶中的培養基取出離心後,去上清,添加6ml新的*培養基,重新加入原T25培養瓶。
(4)如果細胞長滿90%請及時進行細胞傳代,傳代培養用本公司附帶的*培養基。
(5)接到細胞次日,請檢查細胞是否汙染,若發現汙染或疑似汙染,請及時與我們取得聯係。
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
(1)準備MEM/F-12(1:1)培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。
(2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
(3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二.細胞處理:
(1)複蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養,補加培養基至6ml。
(2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1、將上清取出,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中,置於37℃培養箱中消化1-2分鍾,然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓並脫落,迅速拿回操作台,輕敲幾下培養瓶後加少量*培養基終止消化。
3、輕輕打勻後吸出,和上清一起在1000RPM條件下離心5分鍾,棄去上清液,加1-2mL培養液後吹勻。
4、將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。
注:次傳代推薦傳代比例為1:2,以後傳代比例可根據客戶需要自己決定。
(3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
下麵T25瓶為類;
1、細胞凍存時,取出上清,PBS清洗一遍後加入1ml胰酶,細胞變圓脫落後,加入1ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2、4min1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
3、將凍存管置於程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以後轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
18新利苹果客户端密码主要產品和服務介紹:
一、原代細胞服務:
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等
原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務
二、細胞係服務:
細胞株/係培養、增殖、凍存和相關說明書
細胞係培養過程的技術指導
細胞係培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等
三、iPS細胞服務:
iPS細胞基礎培養(有滋養層or無滋養層)
iPS細胞增殖及冷凍保存
iPS基礎培養技術實習
新藥及實驗儀器上市前評估
四、其他技術外包服務、客戶定製服務等
