THP-1人單核細胞白血病細胞/STR鑒定

THP-1人單核細胞白血病細胞/STR鑒定

細胞介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用，無表麵和胞質免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導單核細胞分化。

細胞特性

1） 來源：急性單核細胞白血病，單核細胞

2） 形態：單核細胞，懸浮

3） 含量：>1x106 細胞數

4） 規格：T25瓶（15ml離心管）或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅(jin) 供科研使用。

運輸和保存

幹冰運輸及複蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

（2）複蘇的存活細胞15mL離心管常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。

細胞接收後的處理

1） 收到細胞後請勿拆除封口膜，75%酒精消毒擦拭瓶壁將15mL離心管置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約1-2h，若發現離心管破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2）請在細胞移入2個(ge) 新的T25培養(yang) 瓶後，在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛移入培養(yang) 瓶的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。

THP-1人單核細胞白血病細胞/STR鑒定

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇(細胞培養(yang) 級 推薦：iCell-8211)；雙抗，1%。

2） 參考傳(chuan) 代比例：傳(chuan) 代時控製細胞密度在2-4 ×105cell / mL，並在細胞生長至8-10 ×105cell / mL時進行傳(chuan) 代。

3） 參考換液頻率：傳(chuan) 代時換液

4） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

5） 凍存液：完quan培養(yang) 液95%，DMSO 5%（使用該凍存液後，按照我庫的經驗複蘇存活率約50%，複蘇後需要額外培養(yang) 7-10天才能恢複生長）

6） 【注意事項】：

該細胞為(wei) 懸浮細胞，根據培養(yang) 經驗以及客戶的反饋，傳(chuan) 代時使用【半換液法】對細胞狀態較為(wei) 有利，因此我庫建議您使用【半換液法】進行傳(chuan) 代。

1. 您在收到我們(men) 提供的用15mL離心管（充液為(wei) 完quan培養(yang) 基）發貨的細胞後，請不要通過離心的方式收集細胞，可以先準備兩(liang) 個(ge) 新的T25培養(yang) 瓶，然後將細胞混合均勻後移入兩(liang) 個(ge) 新的T25培養(yang) 瓶中，補加培養(yang) 基到10ml。放入到37℃培養(yang) 箱中。

2. thp-1懸浮細胞。該細胞在培養(yang) 時更喜歡溫和處理，培養(yang) 時盡量少對細胞進行離心處理以此造成對細胞的傷(shang) 害。換液時不要全培養(yang) 基更換，建議您使用【半換液法】進行傳(chuan) 代，添加細胞培養(yang) 基以稀釋細胞至維持密度即可。

3.  細胞對血清質量較為(wei) 敏感，我庫建議您使用進口大品pai優(you) 質血清進行培養(yang) 。FBS不要滅活，如果細胞生長緩慢請嚐試使用其他FBS或暫時將FBS濃度增加到20%

4.  該細胞的培養(yang) 液中需添加β-巰基乙醇（細胞培養(yang) 級別），若不添加，可能會(hui) 對細胞狀態造成影響。

β-巰基乙醇的穩定性有限，不可將β-巰基乙醇添加到完quan培養(yang) 基中長期儲(chu) 存，在每次傳(chuan) 代或液體(ti) 添加時再添加β-巰基乙醇。

β-巰基乙醇（2-qiu基乙醇）被添加到淋巴細胞或其他細胞培養(yang) 物中，因為(wei) 在培養(yang) 基中使用的FBS中氨基酸半胱an酸供不應求，而胱an酸則很多。有些細胞（例如T細胞）無法將半胱an酸轉運到細胞質中，必須將其轉化為(wei) 半胱an酸。β-巰基乙醇將胱an酸還原為(wei) 可被細胞轉運的形式，然後轉化為(wei) 細胞生長所需的半胱an酸。  β-巰基乙醇還是一種還原劑，可以分解培養(yang) 中細胞產(chan) 生的許多有毒代謝產(chan) 物，從(cong) 而改善細胞周圍的環境。

5.  該細胞對細胞密度較為(wei) 敏感，培養(yang) 、傳(chuan) 代時請注意保持細胞密度在合適的範圍（具體(ti) 請參考細胞說明書(shu) ）。

6 . 該細胞凍存後複蘇率較低，凍存時請酌情提高細胞量。

7 .通常情況下可以通過向正在生長的細胞中添加完quan培養(yang) 基來維持細胞的生長，每7天可以將細胞離心並重懸於(yu) 新配的培養(yang) 基中，來完成細胞的全換液。

ATCC有關(guan) thp-1細胞保持細胞活力的說明

（頻繁的細胞計數是監測thp-1的最佳方法。這些細胞應該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yang) 基（使它們(men) 具有條件培養(yang) 基）來培養(yang) 。您不需要每次都離心細胞並重新傳(chuan) 代。當在我們(men) 的實驗室中培養(yang) 時，到第2天，細胞通常可以擴增到具有更多培養(yang) 基的更大的燒瓶中。當細胞密度達到8×10 5個(ge) 活細胞/ ml時需要進行傳(chuan) 代。不允許細胞密度超過1×10（6）活細胞/ ml。）

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的複蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完quan培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞換液: 通常情況下可以通過向正在生長的細胞中添加完quan培養(yang) 基來維持細胞的生長，每7天可以將細胞離心並重懸於(yu) 新配的培養(yang) 基中，來完成細胞的全換液。

3） 細胞傳(chuan) 代：傳(chuan) 代時控製細胞密度在2-4 ×105cell / mL，並在細胞生長至8-10 ×105cell / mL時進行傳(chuan) 代。

4） 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。    

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數板計數。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞，根據細胞數量加入凍存液，輕輕混勻，DMSO終濃度為(wei) 5%，細胞密度2x106/支，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。