細胞凋亡形態學檢測方法

細胞凋亡形態學檢測方法

細胞凋亡的早期形態學改變是核染色質濃聚、固縮,聚集在核膜周邊，然後是胞漿濃縮、胞膜起泡,繼而細胞核裂解成若幹碎片，細胞膜將胞質和染色質斷片包裹，胞漿內(nei) 形成多個(ge) 膜結構尚完整的“小泡”及 “凋亡小體(ti) ” (apoptoticbody)。這不同於(yu) 細胞壞死的細胞腫脹、胞膜破裂、細胞崩解。
       根據凋亡細胞固有的形態特征，至今為(wei) 止，已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。
 

 鏡像綺點依靠多年在細胞培養(yang) 方麵的積累，為(wei) 客戶提供完整的細胞CRO解決(jue) 方案。根據客戶需求，直接在細胞水平進行藥物或者試劑的刺激，觀察細胞狀態的變化或者特定通路上mRNA或蛋白的變化，也可以先製作動物模型，對動物進行處理後，分離特定的原代細胞進行需要的檢測。

    同時，我們(men) 可以依照客戶提供的具體(ti) 實驗方案進行操作，也可以根據客戶要求進行實驗設計，並根據客戶實驗的規模和難度提供詳細的報價(jia) 和實驗周期規劃。

       一、光學顯微鏡觀察

       凋亡細胞的主要特征為(wei) 核染色質致密深染，形成致密質塊，有時可碎裂。在HE染色的組織切片中細胞體(ti) 積縮小，胞質致密、嗜酸性染色增強，並可形成凋亡小體(ti) 。在組織中凋亡細胞常以分散單個(ge) 形式存在，凋亡細胞與(yu) 周圍細胞分離，不引起炎症反應。
本方法簡便易行，但在細胞密集的組織中對於(yu) 改變不典型的細胞判斷較困難，常缺乏較為(wei) 特征的指標，具有較強的主觀性，重複性差。本方法可用於(yu) 調亡現象的初步觀察，作為(wei) 分析指標之一。
       檢測方法：細胞塗片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細胞的形態改變，結合顯微測量工具可作凋亡細胞計數。
       二、視頻時差顯微技術
       此方法用於(yu) 細胞培養(yang) ，通過相差顯微鏡可動態觀察細胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細胞表和外形的變化。凋胞與(yu) 基質分離，胞體(ti) 變圓、收縮、出泡，有的細胞拉長，出現釘狀突起，特續數小時後細胞膜破裂，細胞溶解，通過連續觀察，本方法可養(yang) 壑培養(yang) 中的凋亡細胞，但不能用於(yu) 病理組織。
       檢測方法：收集2×105細胞/ml培胞，置於(yu) 多孔培養(yang) 板，加入凋亡誘導劑，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細胞的動態改變，每隔分鍾30秒作序列攝影，連續24小時。如同進進行熒光染色，可參熒光晃微鏡下觀察和攝影。
       三、電子顯微鏡觀察

雖然光學顯微鏡下可以看見胞膜起泡現象和凋亡小體(ti) ,但凋亡細胞的形態學變化大多發生在超微結構,因此用光鏡觀察難以令人滿意,而透射電鏡可清楚地觀察到細胞結構在凋亡不同時期的變化。電鏡形態學觀察是迄今為(wei) 止判斷凋亡經典、可靠的方法,被認為(wei) 是確定細胞凋亡的金標準。

       缺點：
       (1)隻能定性,不能定量;
       (2)標本處理過程複雜,設備相對昂貴,對檢查者的技術水平要求較高,不適於(yu) 大批標本檢測;
       (3)在組織切片上進行電鏡觀察時,有時凋亡很難與(yu) 正常細胞有絲(si) 分裂相鑒別,因為(wei) 兩(liang) 種情況下都可出現染色質濃聚。如同時進行熒光染色,可彌補電鏡檢查的不足。
       檢測方法：透射電鏡標本經戊二醛和餓酸雙重固定，丙酮脫水，環氧樹脂包埋，超薄切片，醋酸枸椽酸電子又重染色，透射電鏡觀察。掃描電鏡標本經戊二醛和餓酸雙重固定，乙醇逐級脫水，CO2臨(lin) 界點幹燥，真空噴金，掃描電鏡觀察。
       四、流式細胞技術
       流式細胞儀(yi) 檢測凋亡細胞是通過檢查其光射特征及熒光參數時行的。細胞穿過流式細胞儀(yi) 的激光束集點時使激光發生散射，分析散射光可以提供細胞大小及結構的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩(liang) 種，前向散射光的強度與(yu) 細胞大小、體(ti) 積相產(chan) ，右向角射光的強度與(yu) 細胞結構的析射性、顆粒性（granu-larity）有關(guan) 。

細胞凋亡形態學檢測方法
       細胞凋亡過程中出現的形態改變如細胞皺縮、胞膜起泡、核濃縮和碎裂等可以使光散射特性發生改變。早期凋亡細胞主要表現為(wei) 前向散射光減弱而右向角散射光增強或不變，前者反映了細胞的皺縮，後者反映了細胞的核逐縮及碎裂。晚期凋亡細胞的前向散射光和右向角散射光均減弱。
       由於(yu) 光散射牧場生並非凋亡細胞的特異性指標，細胞的機械性損傷(shang) 和細胞壞死也可以使前向散射光減弱。因此，隻有將光散射特性的檢測與(yu) 熒光參數的檢測結合起來才能準確地辨認凋亡細胞。
       細胞凋亡過程中核酸內(nei) 切酶在DNA分子核小體(ti) 間的降解，導致小分子DNA漏出，核DNA含量下降，細胞熒光染色後作流式細胞儀(yi) 分析，可以發現在DNA直方圖上正常二倍體(ti) 細胞的Go/G1峰前出現一個(ge) 亞(ya) 二倍體(ti) 峰（xub-G1峰，即AP峰--apoptotic peak）,代表凋亡細胞。
       根據此亞(ya) 二倍體(ti) 峰可以計算凋亡細胞的百分率。此外，流式細胞術還可以通過測定線粒體(ti) 膜的電位、溶酶體(ti) 質子泵的活性及細胞DNA/總蛋白質比例等方法辨認凋亡細胞。
       檢測方法：獲取密度1×106細胞/ml左右的細胞懸液，精洗，固定，熒光染料染色，上流式細胞儀(yi) 分析。                                     

一站式細胞解決(jue) 方案

    針對基礎及臨(lin) 床研發中的原代細胞和iPS細胞的實驗，由於(yu) 原代細胞的分離和培養(yang) 難度大，iPS細胞製作和分化的實驗操作複雜，除長期進行原代和iPS培養(yang) 工作的實驗室，想要獲得足夠量的狀態好的細胞比較困難。

服務流程：

    1.聯係我們(men) ，溝通客戶實驗計劃及目標，評估實驗的的可行性。    

    2.依照客戶要求，設計相應的實驗；或客戶已有實驗方案發送給我們(men) ，我們(men) 研究方案的可操作性。    

    3.確定終的實驗方案，報價(jia) 和周期。    

    4.簽訂服務合同，支付預付款。    

    5.開始實驗服務，並定期向客戶反饋和交流。    

    6.實驗完成，提供完整實驗說明和部分實驗結果。    

    7.支付尾款，向客戶提供完整的全部實驗報告和原始數據。    

    8.項目完成。

• iCell-E15190h白脂素（Asprosin）ELISA試劑盒
• iCell-012激光掃描共聚焦顯微鏡
• iCell-011細胞HE染色
• iCell-00103D細胞培養技術
• iCell-006染色體核型分析常用的方法
• iCell-005免疫組化實驗
• iCell-CRO04MTT法細胞活性檢測
• iCell-CRO03Western blot/CCK8/MTT/Transwell細胞遷移
• iCell-CRO01穩定細胞株構建/鏡像綺點（iCell）