3AO人卵巢癌細胞/STR鑒定

1） 來源：卵巢
2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x10^6
4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式
（1）幹冰運輸，收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇；
（2）存活細胞，收到後應繼續生長，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。
（3）收到細胞後請拍照，3天內(nei) 如果發現汙染，請及時拍照與(yu) 我們(men) 聯係。
細胞用途：僅(jin) 供科研使用。
細胞接收後的處理：
1） 收到細胞後，請檢查發貨培養(yang) 瓶的狀況，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳(chuan) 代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 細胞需要售後時提供收到細胞時細胞狀態的依據。
3） 觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會(hui) 有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落後抱團生長，可將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到加有按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的培養(yang) 基的原培養(yang) 瓶中（或新的培養(yang) 瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，然後抽出瓶中的培養(yang) 基和細胞1000rpm離心5分鍾，棄去上清重懸後接種到新的培養(yang) 瓶中（加入按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的培養(yang) 基）。
6）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代 。

3AO人卵巢癌細胞/STR鑒定

細胞培養(yang) 步驟
一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：
1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。
2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。
4 . 收到細胞後傳(chuan) 代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中，建議客戶凍存一支備用，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。
3） 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
下麵T25瓶為(wei) 例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後，PBS清洗瓶底1-2次後加入1mlyi酶，細胞變圓脫落後，加入2ml培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鍾去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為(wei) 10%。加入DMSO後迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個(ge) 凍存管細胞數目大於(yu) 1X10^6個(ge) 細胞凍存。
3．將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(ge) 小時以後轉入液氮灌儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。