大鼠心肌細胞H9C2該怎麽進行細胞處理？

　　大鼠心肌細胞H9C2是源自胚胎大鼠心髒的大鼠心肌細胞，具有許多骨骼肌特征。該細胞係中的成肌細胞可以融合形成多核肌管，並對乙酰膽堿刺激作出反應。如果培養基中的血清濃度降低到1％，融合會很快發生。那麽細胞該怎麽處理呢？
 

　　1、複蘇細胞：將裝有1ml細胞懸液的冷凍保存管放入37℃水浴中（水麵應低於冷凍保存管的蓋部分）並搖勻並融化，然後將其轉移到裝有4ml培養基的15ml離心管中。並混合均勻。以1000rpm離心4分鍾，棄去上清液，加入1ml培養基並充分吹掃。然後將所有細胞懸浮液轉移至含有5ml培養基的培養瓶中過夜培養。第二天，更換液體並檢查細胞密度。

　　2、細胞傳代：如果大鼠心肌細胞H9C2的密度達到80％-90％，則可以進行傳代培養。

　　（1）丟棄培養上清液，並用不含鈣或鎂離子的PBS潤濕細胞1-2次。

　　（2）在培養瓶中加入2ml消化液（0.25％胰蛋白酶-0.53m培養基），在37℃培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞的消化情況。如果大多數細胞變圓形並脫落，請迅速將其帶回手術台，輕按培養瓶幾次，然後加入3ml培養基終止消化。

　　（3）輕輕吹動後，將其吸出，移入15ml離心管中，以1000rpm離心4分鍾，棄去上清液，加入1ml培養基，並均勻吹掃。

　　（4）轉移到製備的含有5ml培養基的t-25燒瓶或含有14ml培養基的t-75燒瓶中。

　　3、細胞凍存：大鼠心肌細胞H9C2生長良好時可以冷凍保存。凍結貼壁細胞後，應將其消化並計數。根據細胞傳代方法的1-3步進行消化，並使用血清進行懸浮。直接計數懸浮細胞，離心，重懸血清，並加入DMSO至終濃度10％。加入DMSO後，應迅速混合，並按照每1毫升的量將其分配到冷凍儲存管中。