拿到人肝癌細胞HEPG2後要先這麽處理

　　拿到人肝癌細胞HEPG2後要先這麽處理。

　　1、複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。

　　2、人肝癌細胞HEPG2細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　（1）棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　（2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）於培養瓶中，置於37℃培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。

　　（3）按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養液後吹勻。

　　（4）收到人肝癌細胞後推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，後續傳代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。

　　人肝癌細胞HEPG2細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

　　下麵T25瓶為例；

　　（1）細胞凍存時，棄去培養基後，PBS清洗瓶底1-2次後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

　　（2）1000RPM離心5分鍾去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO後迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大於1X106個細胞凍存。

　　（3）將凍存管置於程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以後轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。