你真的了解人臍靜脈細胞HUVEC實驗步驟嗎？

　　人臍靜脈細胞HUVEC是一種來源於臍帶組織的幹細胞。它是臍靜脈的重要細胞之一，在理論上可以無限期地通過。因此，人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）經常用於血管內皮細胞實驗，而不是靜脈內皮細胞或動脈內皮細胞。臍靜脈內皮細胞易於獲得且來源充足，因此，臍靜脈內皮細胞經常用於血管內皮研究。那麽，您真的了解它的培養實驗步驟嗎？
 

　　1、將15-20cm長的新生兒臍帶儲存在無菌PBS溶液中。（注意：應在4℃下保存24小時，在室溫下保存不超過6小時，否則將被丟棄。）

　　2、將鈍針插入臍靜脈管，並用無菌PBS溶液衝洗3-5次，直到將髒血洗淨為止。

　　3、用手術鉗夾住臍帶下端，添加15ml膠原酶（1mg/ml）在室溫下消化15-20分鍾，並不時搖動臍帶。

　　4、消化後，鬆開下部的手術鉗，將消化液倒入50ml無菌離心管中，並用無菌PBS溶液衝洗臍帶2-3次。

　　5、離心收集的液體（2000rpm）3分鍾。

　　6、除去上清液，加入10mlM199培養基（添加10u/mlbFGF），用肘部吹動細胞，將所有液體轉移到裝有明膠的培養瓶中，並在37℃下培養。（注：在每個培養瓶中加入3-4ml無菌1％明膠溶液，充分搖動以使明膠溶液*覆蓋瓶底，並在37℃下孵育至少2小時。使用前將明膠溶液倒入。明膠塗層有助於細胞粘附。）

　　7、將人臍靜脈細胞HUVEC培養24小時後，倒出培養基並用無菌PBS溶液洗滌2-3次。洗去紅細胞和死細胞，並加入10ml新鮮的M199培養基。

　　8、應每2天更換一次介質（每次應更換2/3的介質）。

　　9、培養5-7天後，細胞可以生長到80-90％的單層，然後可以傳代。

　　10、倒出培養基，用無菌PBS溶液洗滌2-3次，添加2-3ml消化液（0.25％胰蛋白酶+0.1％EDTA）消化細胞。在顯微鏡下觀察。一旦細胞變圓，添加2-3次含血清的DMEM培養基以終止反應。

　　11、用彎頭吹幹細胞，然後將消化的細胞以2000rpm的速度轉移到50ml無菌離心管中3分鍾。

　　12、倒出上清液，加入10ml新鮮培養基。通常，可以在一瓶中傳代3-4瓶細胞，然後據此傳代培養。

　　13、人臍靜脈細胞HUVEC通常傳代2-3代（約20天）用於各種實驗。