支原體清除服務

很多科研小夥(huo) 伴在細胞培養(yang) 的過程中，總是出現各種各樣的情況和問題，比如，細胞漏液、不貼壁、細胞有黑點、支原體(ti) 汙染、不增殖、細胞老化變形、複蘇存活率低等等，這些問題對於(yu) 參與(yu) 細胞實驗的小夥(huo) 伴來說，是急需解決(jue) 的大問題，好不容易買(mai) 來的細胞，剛剛進行培養(yang) 傳(chuan) 代，就出現了以上的各種問題，這樣的情況通常都會(hui) 令小夥(huo) 伴們(men) 無比抓狂。

因為(wei) 想要開展後續實驗，培養(yang) 細胞往往是關(guan) 鍵要事，細胞養(yang) 不好，後續實驗就無法進行。

如果排除了其他試劑選擇不當、細胞株老化、複蘇存活率低等原因，而仍有上述一種或幾種情況，那麽(me) 還有一種情況發生，那就是你的細胞可能被汙染了。所以不管發生哪種類型的汙染情況都會(hui) 造成相同的結果，就是實驗需要重新做，這樣不僅(jin) 增加了實驗成本，而且又浪費工作時間，還增加了實驗的重複性。

而且以汙染細胞和未汙染細胞為(wei) 基礎進行實驗時，有可能得到的實驗結果*不同。更為(wei) 嚴(yan) 重的是，如果你所研究的細胞是另外一種細胞的話，那所做的所有工作可能會(hui) 一文不值。

那麽(me) 為(wei) 什麽(me) 一定要進行支原體(ti) 汙染清除呢？

支原體(ti) 汙染清除要求

從(cong) 2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養(yang) 都要進行支原體(ti) 檢測。以細胞為(wei) 載體(ti) 的科學研究，如果不能保證所用的細胞無支原體(ti) 汙染，則實驗結果很可能是不可靠甚至是*錯誤的！

支原體(ti) 直徑約為(wei) 0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體(ti) 無效。支原體(ti) 汙染是細胞培養(yang) 領域的一個(ge) 世界性問題，世界各國細胞係支原體(ti) 汙染的平均比例為(wei) 30-60%。

支原體(ti) 可通過細胞之間交叉汙染，操作人員的口腔、皮膚造成汙染，或者血清等添加物而帶入汙染。

電鏡下的支原體(ti)

支原體(ti) 在光學顯微鏡下不可見，一般不會(hui) 引起培養(yang) 物混濁，因此細胞被支原體(ti) 汙染一般難以察覺。支原體(ti) 會(hui) 消耗必須氨基酸，影響細胞生長速率，促進代謝物積累，改變細胞形態，影響 DNA、RNA 以及蛋白質的合成，抑製細胞因子表達，改變被汙染細胞的基因表達譜，誘導染色體(ti) 畸變。

支原體(ti) 的危害

支原體(ti) 清除服務包括以下幾個(ge) 方麵：

服務對象

1. 實驗室的種子細胞，如從(cong) ATCC、JCRB、DMSZ等國外專(zhuan) 業(ye) 細胞庫采購的珍貴細胞係；

2. 組織珍貴的原代細胞；

3. 需要進行基因編輯的細胞；

4. 各類幹細胞（含iPS細胞）；

5. 稀有細胞。

服務內(nei) 容

1.根據客戶提供的細胞名稱、細胞代次、細胞類型製定細胞的支原體(ti) 清除方案；

2. 細胞STR鑒定（選做）；

3. 支原體(ti) PCR法檢測支原體(ti) 汙染程度；

4. 細胞的支原體(ti) 清除，一般汙染單一支原體(ti) 的清除時間為(wei) 2周左右，感染多種支原體(ti) 且非常嚴(yan) 重的細胞，清除時間需要延長，約3-4左右；

5. 2-3周後，再次進行支原體(ti) 檢測，如果細胞支原體(ti) 清除幹淨，將換為(wei) 支原體(ti) 預防培養(yang) 方案，繼續維持一周左右時間。如未清除幹淨，則適當延長1-2周繼續清除頑固支原體(ti) ，2周後再次進行複檢。

服務周期與(yu) 價(jia) 格

送樣要求

1. 複蘇細胞（充液運輸）：生長狀態良好的細胞，待達70%-80%匯合時，去掉舊培養(yang) 液換入新培養(yang) 液，量要達到培養(yang) 瓶的頸部（過滿易汙染），保留少許空間，旋緊瓶蓋，避免空氣過多運輸中氣泡運動易使細胞脫落。

2. 凍存細胞（幹冰運輸）：將幹冰提前置於(yu) 塑料泡沫盒中，以較快的速度將細胞凍存管從(cong) 液氮轉入幹冰中，用膠帶封好泡沫盒，在外麵加套一層紙盒，延緩幹冰揮發。

注：根據距離選擇泡沫盒，泡沫盒壁的厚度不小於(yu) 50mm，內(nei) 部空間不小於(yu) 200× 200× 200mm，放入足量幹冰。

支原體(ti) 清除案例

如上圖1所示，左側(ce) 為(wei) 支原體(ti) 汙染的MCF-7細胞，右側(ce) 為(wei) 支原體(ti) 清除後的MCF-7細胞，倒置顯微鏡下可明顯看出細胞間隙間黑點明顯減少，細胞邊緣清晰，狀態良好。

如上圖2所示，左側(ce) 為(wei) 支原體(ti) 汙染的Hep G2細胞，右側(ce) 為(wei) 支原體(ti) 清除試劑處理的Hep G2細胞。左側(ce) 有支原體(ti) 汙染的細胞樣品可以觀察到細胞核周圍微粒狀或絲(si) 狀藍色熒光。支原體(ti) 汙染嚴(yan) 重的細胞可以觀察到大量微粒狀或絲(si) 狀藍色熒光。右側(ce) 細胞支原體(ti) 汙染被清除幹淨，僅(jin) 觀察到細胞核的藍色熒光，證明支原體(ti) 已被清除幹淨。

注意事項

1. 由於(yu) 各個(ge) 實驗室細胞培養(yang) 體(ti) 係不同，且更換體(ti) 係細胞會(hui) 需要一段時間的適應，故本服務需客戶自行提供足量的培養(yang) 體(ti) 係；

2. 根據客戶需求，STR鑒定服務為(wei) 選做項目，鏡像綺點生物承諾對於(yu) 支原體(ti) 清除服務細胞進行單獨隔離培養(yang) ，客戶為(wei) 保證實驗嚴(yan) 謹性，可選擇我司進行STR鑒定服務；

3. 由於(yu) 細胞隨時可能會(hui) 存在交叉的風險，隻認可我司接收細胞後第yi時間進行的STR鑒定結果；

提供結果

原始支原體(ti) PCR結果圖片和無支原體(ti) 汙染的細胞（根據客戶需要選擇充複蘇/凍存發貨形式）。

保密承諾

我公司鄭重承諾：客戶提供產(chan) 品的檢測信息與(yu) 數據，履行保密義(yi) 務，未經客戶許可，不得擅自公開發表或使用，不得泄露給第三方。

支原體(ti) 清除試劑

另外，鏡像綺點還提供可有效抑製並清除多種支原體(ti) 的支原體(ti) 清除劑，包括 Mycoplasma orale, M. arginini, M. hyorhinis和Acholeplasma laidlawii。經過大量實驗驗證對細胞幾乎沒有毒性，對細胞的各種檢測沒有幹擾。通常在細胞培養(yang) 液中加入本試劑約1至2周即可有效抑製和清除支原體(ti) 。

iCell支原體(ti) 清除劑為(wei) 透明淡黃色液體(ti) 。具體(ti) 的工作濃度因支原體(ti) 的種類不同而有所不同，在實際防止支原體(ti) 汙染或清除支原體(ti) 汙染時需摸索適當的工作濃度。

支原體(ti) 清除試劑經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，對細胞無害，對清除支原體(ti) 汙染*，能夠很好的抑製和殺滅支原體(ti) 。

所以，科研小夥(huo) 伴們(men) 如果你們(men) 手裏珍貴的細胞被支原體(ti) 汙染了，沒有辦法做實驗，沒有其他地方采購，千萬(wan) 不要扔掉，交給我們(men) ，相信我們(men) ，我們(men) 會(hui) 還你一個(ge) 狀態好又無汙染的好細胞，而且我們(men) 保證，不成功不收費的哦~~~