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小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養方法

更新更新時間:2019-12-27 瀏覽次數:2024

平滑肌即無紋肌的通稱,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構成。它不構成獨立的器官,而隻是成為(wei) 構成體(ti) 壁和內(nei) 髒壁的因素(肌層)。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結構或中空器官;在功能上可以通過縮短和產(chan) 生張力使器官發生運動和變形,也可產(chan) 生連續收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。

小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與(yu) 臨(lin) 床許多疾病的病理生理過程有關(guan) .如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發病時,可以檢測到氣管平滑肌發生數目的增生和肥大,表型也發生改變,由收縮型轉為(wei) 合成型與(yu) 分泌型,並分泌多種與(yu) 細胞因子;而且出現向氣管腔遷移的跡象。

 

小鼠支氣管平滑肌細胞來源於(yu) 實驗動物正常支氣管組織長梭狀細胞,貼壁培養(yang) 。通過平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色鑒定為(wei) 陽性鑒定純度高於(yu) 90%不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌。

1.試驗所需儀器設備及試劑

(1)儀(yi) 器

儀(yi) 器名稱

規格型號

廠家

生物安全櫃

BSC-1500ⅡA2-X

濟南鑫貝西生物技術有限公司

CO2細胞培養(yang) 箱

BC-J160S

上海博迅實業(ye) 有限公司

熒光倒置顯微鏡

DS-Ri2

Nikon

高速冷凍離心機

Multifuge X1R

Thermo Fisher

電熱恒溫鼓風幹燥箱

DHG-9123A

上海精宏實驗設備有限公司

(2)試劑耗材

試劑名稱

規格/貨號

廠家

T25細胞培養(yang) 瓶

430639

Coming

血球計數板

Neubauer improved

Marienfeld

細胞培養(yang) 孔板

WHB-24

上海臥宏生物科技有限公司

平滑肌細胞*培養(yang) 基

PriMed-iCell-004

18新利苹果客户端密码

0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

1734858

Gibico

 

2.小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yang)

1) 取4-5周齡的小鼠,斷頸處死後,泡於(yu) 75%的酒精中,

2) 剖開胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中,

3) 在體(ti) 視顯微鏡下,小心分離出下遊支氣管,

4) 用眼科剪及鑷子分離肌層並剪碎,

5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過夜消化,

6) 第二天置於(yu) 37℃水浴搖床中消化2~3h,

7) 待液體(ti) 變渾濁後加入*培養(yang) 基終止消化,充分吹打,

8) 過100目篩網,收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清,

9) 用*培養(yang) 基重懸沉澱,鋪瓶。

除了上述的細胞分離方法以外,鏡像綺點還有很多關(guan) 於(yu) 其他細胞的分離方法,想要學習(xi) 的小夥(huo) 伴可以來鏡像綺點進行現場學習(xi) ,如果想要其他原代分離培養(yang) 方法,可在購買(mai) 相應的細胞過程中,贈送該細胞的分離方法及培養(yang) 條件,想要了解更多,打電話或谘詢相關(guan) 工作人員。

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