鏡像綺點 || 原代小鼠心肌成纖維細胞分離和培養方法

       小鼠心肌成纖維細胞的組織來源於(yu) 實驗動物的正常心髒組織，心髒是脊椎動物身體(ti) 中重要的一個(ge) 器官，主要功能是提供壓力，把血液運行至身體(ti) 各個(ge) 部分。心髒的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以供應氧和各種營養(yang) 物質，並帶走代謝的終產(chan) 物（如二氧化碳、無機鹽、尿素和尿酸等），使細胞維持正常的代謝和功能。
       心髒中，心肌成纖維細胞約占正常心肌組織細胞總數的60%-70%，是心髒中非心肌細胞的主要組成部分，廣泛存在於(yu) 心髒組織中，包圍心肌細胞，連接心肌細胞間質，與(yu) 缺血性心髒病、炎症、肥大、梗死等病理狀態密切相關(guan) 。細胞生長方式以長梭狀細胞，貼壁培養(yang) 。

       小鼠心肌成纖維細胞的方法有很多，鏡像綺點提供的心肌成纖維細胞分離方法有兩(liang) 種，一種是貼塊法，一種是消化法，這兩(liang) 種方法都可以用於(yu) 分離和培養(yang) 原代細胞。

       實驗器械：
       1.培養(yang) 皿
       2.T-25細胞培養(yang) 瓶
       3.100目不鏽鋼網篩
       4.200目不鏽鋼網篩
       5.眼科剪
       6.眼科鑷
       7.離心管（15ml、50ml）

       實驗分離和培養(yang) 步驟：

       1. 小鼠頸椎脫臼處死後，剃除腹胸部的被毛，放入裝有75%酒精的燒杯中浸泡5min。

       2. 取出小鼠，在無菌環境下打開胸腔，取出心髒組織，注入盛有無菌1×PBS的培養(yang) 皿中，洗淨組織表麵的血液。

       3. 將清洗幹淨的心髒組織轉入裝有75%酒精的培養(yang) 皿中浸泡15s以殺死大多數的心髒被膜細胞，浸泡完成後立即轉入裝有無菌1×PBS的培養(yang) 皿中震蕩清洗。

       4. 清洗完成後，用剪刀鑷子配合除去主動脈弓和心房組織，僅(jin) 保留心室部分，再次用1×PBS清洗去除心室內(nei) 的血液。

       5. 將清洗幹淨的心室組織用剪刀減成1mm3大小左右的碎塊，之後用PBS清洗若幹次後按下述兩(liang) 種方法之一進行後續操作。

       A.貼塊法

       6. 將清洗好的碎塊轉入另一培養(yang) 皿中，用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡組織，室溫消化3-5min。

       7. 消化完成後，添加數毫升FBS終止消化，之後吸棄液體(ti) ，加PBS清洗組織塊1伺次後，用200ul吸頭將組織塊平均接種於(yu) T-25培養(yang) 瓶的培養(yang) 麵上，之後將培養(yang) 瓶放置於(yu) 37℃二氧化碳培養(yang) 箱中，靜置2-4h。

       8. 待組織處於(yu) 略微脫水的狀態時，小心添加2ml*培養(yang) 基，添加時注意盡量不要將組織塊衝(chong) 起，要使培養(yang) 基接觸所有的組織塊。

       9. 之後放入培養(yang) 箱中繼續培養(yang) ，一般2-4天後成纖維細胞會(hui) 從(cong) 組織塊周圍爬出，待爬出的細胞有較多數量時，可將細胞消化下來，去除組織塊，轉入另一培養(yang) 瓶中培養(yang) 。

       B.消化法

       6. 將清洗好的碎塊轉入另一離心管中，加入混合消化液（0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型膠原酶）37℃水浴消化8min後，吸取上層混懸液棄去。

       7. 餘(yu) 下組織加入混合消化液10ml，37℃水浴震蕩消化10min；吸取上層懸液至另一離心管中，加入適量FBS終止反應；剩餘(yu) 沉澱物再加消化液消化3-5次，直至組織塊*消化。

       8. 按1∶1加入含血清的培養(yang) 基，中止酶反應，懸液過150目網篩去除較大的組織塊。

       9. 收集全部中止後的消化液於(yu) 離心管中，300g，離心10 min，棄去上清，加入培養(yang) 液重懸細胞後計活細胞數。

      10. 調整細胞密度以1× 106個(ge) /ml 接種入的T-25培養(yang) 瓶中，每瓶添加2ml細胞懸液。

      11. 培養(yang) 瓶放置於(yu) 37℃，5% CO2培養(yang) 箱中靜置40min後，吸棄上清液以去除未貼壁的非成纖維細胞和死細胞，再添加5ml*培養(yang) 基繼續培養(yang) 。

       除了上述的細胞分離方法以外，鏡像綺點還有很多關(guan) 於(yu) 其他細胞的分離方法，想要學習(xi) 的小夥(huo) 伴可以來鏡像綺點進行現場學習(xi) ，如果想要其他原代分離培養(yang) 方法，可在購買(mai) 相應的細胞過程中，贈送該細胞的分離方法及培養(yang) 條件，想要了解更多，打電話或谘詢相關(guan) 工作人員。